Renishaw a le plaisir d’introduire la fonctionnalité de microscopie d’imagerie à durée de vie de fluorescence (FLIM) sur son microscope confocal Raman inVia™. En partenariat avec Becker & Hickl GmbH, les pionniers du comptage de photons uniques corrélé dans le temps (TCSPC), le système combine à la fois Raman et FLIM dans un seul instrument. Cette intégration peut superposer les images FLIM et Raman avec une corrélation pixel à pixel, améliorant ainsi la compréhension des échantillons dans une gamme d’applications.
Crédit image : Renishaw
Imagerie FLIM
Dans le système, lorsque la lumière d’un laser pulsé interagit avec un fluorophore, la durée de vie de la fluorescence est mesurée à l’aide d’un détecteur avancé et d’une électronique à grande vitesse. Cette durée de vie de fluorescence est le temps caractéristique pendant lequel un fluorophore reste dans un état électronique excité avant de revenir à l’état fondamental en émettant un photon. La durée de vie de la décroissance de la fluorescence est sensible à l’environnement moléculaire et aux changements de conformation moléculaire qui en résultent. La technique FLIM peut être utilisée pour étudier une gamme de propriétés allant de la concentration pH/ion/oxygène à la liaison moléculaire.
FLIM combiné avec microscopie Raman
La microscopie FLIM et Raman sont des méthodes complémentaires pour l’imagerie sans étiquette de cellules biologiques et de coupes de tissus. FLIM donne un aperçu des interactions moléculaires et peut être réalisé au moins 10 fois plus rapidement que l’imagerie Raman. La spectroscopie Raman offre une spécificité chimique élevée et des images chimiques à haute résolution. Cette combinaison de techniques est idéale pour une identification rapide des régions d’intérêt par FLIM, suivie d’une caractérisation chimique et structurale par imagerie Raman.
Pour l’analyse des données FLIM, un logiciel complet de Becker & Hickl est inclus avec des modèles d’analyse multiexponentiels, incomplets et à composantes décalées. Le logiciel comprend également une analyse de phaseur exclusive pour distinguer les populations à vie. La durée de vie de la fluorescence et les images Raman peuvent être directement superposées grâce à l’utilisation de la platine codée haute vitesse Renishaw MS30 très précise pour les deux modalités d’imagerie.
« Nous sommes heureux d’annoncer une nouvelle amélioration de notre microscope inVia Raman primé. Notre collaboration avec les leaders de la technologie FLIM, Becker et Hickl, a produit un microscope FLIM Raman combiné menant à de nouveaux domaines d’application passionnants.
David Reece, responsable du développement commercial de la spectroscopie Renishaw
Pour plus d’informations sur la microscopie d’imagerie à durée de vie de fluorescence (FLIM) : Microscopie d’imagerie à durée de vie de fluorescence (FLIM) (renishaw.com)
Pour plus d’informations sur la spectroscopie Raman Renishaw : www.renishaw.com/raman
