Une entrevue avec Daniel Schieffer, directeur de la technologie, DeNovix
Sommaire
Pourquoi les cellules sont-elles actuellement comptées avec des diapositives ? Combien de fois les lames sont-elles généralement utilisées et que deviennent-elles après leur utilisation ?
Jusqu’à récemment, les cellules étaient généralement comptées sur un hémocytomètre à quartz réutilisable. Avec l’avènement des compteurs de cellules automatisés il y a 12 à 15 ans, les lames jetables se sont généralisées. C’était principalement un moyen pour ces compteurs de cellules de charger et de compter les lames. Bien qu’ils soient pratiques pour les systèmes automatisés, ils introduisent un coût continu supplémentaire pour les laboratoires, et le plastique à usage unique a également une empreinte environnementale importante.
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Chaque diapositive est conçue pour n’être utilisée qu’une seule fois. Il peut y avoir deux comptages par lame, mais ils sont tous à usage unique et sont systématiquement jetés après utilisation. Nous avons entendu des histoires de personnes essayant de réutiliser des diapositives à usage unique ; cependant, pour des raisons de précision, cela n’est pas recommandé par les fabricants de diapositives. Cela augmente également considérablement le temps de manipulation nécessaire pour compter les cellules.
Comment le CellDrop élimine-t-il les lames jetables ? Où sont conservées les cellules et comment le nettoyage complet est-il réalisé entre les analyses ?
Pour améliorer ce système, DeNovix a combiné le meilleur de l’ancien et du nouveau, en remplaçant les lames en plastique par deux surfaces permanentes en saphir de qualité optique. Les surfaces sont positionnées parallèlement les unes aux autres par une vis de haute précision pour former une chambre analogue à un hémocytomètre traditionnel. La technologie de base est adaptée de notre série DS-11 de spectrophotomètres à microvolume et les utilisateurs sont immédiatement familiarisés avec le flux de travail de chargement, de mesure et d’essuyage.
Éliminer les coûts | Automatiser le comptage des cellules
Les chercheurs distribuent les cellules dans la chambre, appuient sur le nombre et l’analyse est effectuée automatiquement. Ensuite, l’échantillon est simplement essuyé avec une lingette de laboratoire sèche et le CellDrop est prêt pour le prochain échantillon. L’une des grandes caractéristiques du CellDrop est un grand écran haute définition avec un aperçu en direct de la chambre de mesure. Cela permet à l’utilisateur de confirmer instantanément que les surfaces sont propres.
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Comment les performances se comparent-elles aux compteurs de cellules basés sur des diapositives ?
Les compteurs à diapositives utilisent des diapositives en plastique qui introduisent des incohérences entre les comptages. Par exemple, si un chercheur a 10 diapositives en plastique, il y aura 10 légères différences entre chacune des diapositives. Le système CellDrop utilise une surface en saphir solide qui est constante à chaque utilisation, et les hauteurs de chambre sont automatiquement calibrées à chaque fois que l’instrument est allumé.
C’est très reproductible d’une course à l’autre. De plus, les comptages de cellules sur CellDrop sont très rapides par rapport à d’autres compteurs automatisés, il y a donc une réelle amélioration des performances dans l’expérience utilisateur.
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Avec quelles applications le CellDrop fonctionne-t-il ?
Nos principales applications sont actuellement dans la viabilité cellulaire, c’est-à-dire les comptages vivants/morts pour la culture de cellules de mammifères, de levures et d’insectes. Deux modèles de CellDrop sont disponibles : double fluorescence et fond clair, ou fond clair uniquement.
Pour les mesures de viabilité en fond clair, les scientifiques utilisent un colorant tel que le bleu Trypan pour colorer les cellules. Le bleu trypan a ses limites, donc pour les laboratoires nécessitant une plus grande spécificité et précision ainsi qu’une plus grande gamme d’applications, nous recommandons l’utilisation de la fluorescence. Le CellDrop peut utiliser des fluorophores courants tels que l’orange d’acridine et l’iodure de propidium (AO/PI), où l’AO fluorescent colore les cellules vivantes en vert et le PI colore les cellules mortes en rouge.
L’utilisation de cela élimine complètement les conjectures du comptage des cellules vivantes/mortes ou du comptage des cellules primaires dans les échantillons potentiellement contaminés. Par exemple, il évite de compter les globules rouges ou d’autres morceaux et débris qu’un algorithme Trypan typique ou un comptage manuel pourrait confondre pour une cellule, ce qui conduit à un comptage inexact.
Vous pouvez également analyser les cellules transfectées par GFP avec CellDrop, en fournissant le pourcentage de viabilité et l’efficacité de la transfection. La plate-forme est conçue pour être ouverte à un large éventail d’applications dans les domaines de la biologie cellulaire, mais aussi de l’environnement, de l’alimentation et de la brasserie.
Le CellDrop peut-il être utilisé avec des échantillons dangereux et infectieux ?
Il existe deux manières de manipuler des échantillons dangereux ou infectieux avec le CellDrop. Tout d’abord, nous l’avons conçu pour s’asseoir dans une armoire de sécurité biologique. Les chercheurs avec un laboratoire de niveau de biosécurité 2 ou de niveau de biosécurité 3 peuvent placer leur CellDrop directement dans la hotte où ils traitent des cellules dangereuses.
La recherche se poursuit normalement, en utilisant un protocole de nettoyage typique sur le CellDrop après le comptage des échantillons de cellules. Par exemple, si de l’eau de Javel à 10 % est utilisée pour stériliser l’équipement et la zone utilisée, celle-ci peut être pulvérisée sur une serviette en papier pour essuyer le CellDrop après utilisation.
Nous autorisons également l’utilisation de lames jetables dans le CellDrop à des fins de matières infectieuses ou dangereuses. S’il y a un échantillon qui, pour une raison quelconque, un laboratoire ne veut vraiment pas toucher directement le CellDrop, une gamme de lames de différents fabricants peut être utilisée.
Dans ce cas, le chercheur placerait la lame sur la surface réutilisable, puis se concentrerait sur les cellules de la lame, la compterait, puis la jetterait dans les déchets dangereux sans que l’échantillon n’ait jamais touché le CellDrop.
Quels logiciels et algorithmes/IA sont fournis avec le compteur de cellules CellDrop ? Comment cela aide-t-il les scientifiques ?
Le logiciel DeNovix est conçu par des scientifiques de la vie pour des scientifiques de la vie. Nous travaillons dur pour rendre le logiciel non seulement intuitif à utiliser, mais aussi très puissant. Les chercheurs peuvent rapidement compter et analyser les résultats immédiatement à bord de l’instrument. Les applications de comptage et tous les algorithmes intégrés sont préinstallés sur les compteurs CellDrop, il n’y a donc pas besoin de tablettes, d’ordinateurs ou de logiciels basés sur le cloud supplémentaires.
Dans chaque application de comptage, nous avons inclus un protocole par défaut qui fonctionne bien pour la plupart des lignées cellulaires courantes. Les clients peuvent facilement optimiser les paramètres pour différents types de cellules, puis les enregistrer dans des protocoles pour des comptages supplémentaires. Les résultats sont enregistrés à bord pour une récupération facile à des fins de réanalyse ou d’audit.
Quelles sont les limites du système CellDrop ?
Le système a été conçu comme un compteur de cellules. Ainsi, comme tout instrument de conception optique, il existe des contraintes de résolution dues à la physique du système. Nous pouvons compter de manière fiable les cellules jusqu’à 4 microns et il n’y a vraiment aucune limitation par rapport à ce que vous pouvez faire avec un comptage manuel ou un autre compteur de cellules automatisé.
Nous l’avons conçu pour offrir le meilleur des deux mondes : la vitesse de l’automatisation mais sans les coûts supplémentaires et les inconvénients des lames jetables. Si vous avez besoin de lames jetables à usage unique pour une raison quelconque, le CellDrop peut s’en charger, mais il donne également aux chercheurs la possibilité d’utiliser un système réutilisable pour la majorité des recherches qu’ils mènent.
Quel avenir pour les compteurs de cellules DeNovix ?
Nous continuerons à étendre les applications et les fonctionnalités de CellDrop avec nos mises à jour logicielles gratuites. Nous travaillons en étroite collaboration avec nos clients et avons déjà de bonnes idées que nous prévoyons de mettre en œuvre.
Plus largement, DeNovix va continuer à chercher des endroits où nous pouvons innover pour faire gagner du temps et de l’argent aux clients et réduire les points douloureux dans le laboratoire. Nous aimons simplifier l’instrumentation et fournir des outils que les scientifiques aimeraient avoir, mais qui ne sont pas rentables compte tenu de la technologie actuelle ou de la nécessité d’acheter un nouveau flux de consommables.
Où les lecteurs peuvent-ils trouver plus d’informations ?
https://www.denovix.com/celldrop/
À propos de Daniel Schieffer
Dan a rejoint NanoDrop Technologies Inc. en 2006 alors qu’il terminait son BS en biotechnologie à l’Université du Delaware. Après avoir contribué au développement du NanoDrop 8000 et du NanoDrop 2000, Dan a accepté un poste d’assistant d’enseignement et de recherche à l’Université de Villanova.
À Villanova, il a contribué au développement d’un nouveau système FRET basé sur la cytométrie en flux pour élucider le rôle de l’organisation de la membrane cellulaire dans l’activation des lymphocytes T CD4+.
Dan a ensuite occupé un poste d’assistant de recherche à l’Université de Pennsylvanie où il a effectué des criblages génétiques à haut débit pour découvrir de nouvelles voies du système immunitaire qui régulent la pathogenèse des virus transmis par les insectes avant de rejoindre DeNovix en 2013. Il est titulaire d’une maîtrise en immunologie de l’Université Villanova.
