Une étude récente publiée dans Pathogènes PLOS épitopes caractérisés reconnus par des anticorps neutralisants (nAbs) provenant d’individus infectés par le virus spumeux simien (SFV).
Étude : Neutralisation des rétrovirus zoonotiques par des anticorps humains : épitopes spécifiques au génotype dans le domaine de liaison aux récepteurs du virus spumeux simien. Crédit d’image : Corona Borealis Studio/Shutterstock.com
Arrière-plan
Les SFV sont répandus chez les primates non humains (PNH) et transmis aux humains par des morsures de PNH infectés. La plupart des humains infectés par le SFV vivent en Afrique centrale. Les SFV établissent une infection persistante chez l’homme avec des modifications physiopathologiques subcliniques. La transmission interhumaine et les maladies graves n’ont pas été enregistrées à ce jour, ce qui suggère un contrôle efficace de la réplication et de la transmission chez l’homme.
L’infection par le SFV induit des atn spécifiques à l’enveloppe (Env) qui inhibent l’entrée virale dans les cellules sensibles dans in vitro. L’Env a trois sous-unités – le peptide leader (LP) et les sous-unités de surface (SU) et transmembranaires (TM). Deux env les variants génétiques définissent le génotype des souches de SFV. Les variantes diffèrent au niveau de la région SUvar au centre de SU, qui chevauche le domaine de liaison au récepteur (RBD) et est ciblée par les attrapes.
L’étude et les conclusions
Dans la présente étude, les chercheurs ont déterminé les épitopes SFV SUvar reconnus par les attrapes de chasseurs infectés en Afrique centrale. Des essais de neutralisation ont été effectués pour définir les épitopes nAb en présence d’un SU recombinant en compétition avec le SU sur l’Env des particules de vecteur viral mousseux (FVV).
Les constructions dérivées de Gorilla génotype I (GI) Env étaient faiblement exprimées, tandis que les constructions dérivées de GII Env étaient fortement exprimées. Le domaine cristallisable du fragment d’immunoglobuline (Fc) a été ajouté à l’extrémité C-terminale de SU pour produire des immunoadhésines pour une stabilité et un rendement accrus. L’expression de l’immunoadhésine GI SU était insuffisante, tandis que les immunoadhésines SU de génotype I (CI) GII et de chimpanzé étaient facilement exprimées.
Par conséquent, les épitopes reconnus par les nAb spécifiques de GII et GI ont été testés à l’aide de GII (IGISU) et CI (ICSU) Immunoadhésines SU, respectivement, compte tenu de la neutralisation croisée des souches de SFV de chimpanzé et de gorille du même génotype. Douze échantillons de plasma de chasseurs infectés par le SFV ont été utilisés, dont un provenant d’un individu infecté par des souches de deux génotypes. Les échantillons ont été testés en incubant avec SU et en ajoutant aux FVV exprimant Env apparié.
ICSU et IGISU a inhibé les attrapes dans les échantillons de génotype appariés, mais pas dans les échantillons de génotype incompatibles. Les chercheurs ont noté que les immunoadhésines ne bloquaient pas complètement les nAb et ont émis l’hypothèse que cela pourrait être dû au manque d’épitopes dans la structure quaternaire et les états monomères. Par conséquent, ils ont évalué l’effet de la glycosylation de type mammifère et de l’oligomérisation des SU dans le blocage des nAb.
IGILes constructions SU ont été produites en présence de kifunensine (un inhibiteur de la mannosidase) pour empêcher l’ajout de glycanes complexes. Certains ont été en outre traités avec de l’endoglycosidase-H pour éliminer tous les glycanes du SU. L’absence de glycanes complexes n’a provoqué aucun changement, mais l’élimination de tous les glycanes a diminué le blocage des atn. Sur les 11 sites de glycosylation dans SU, le mutant knockdown du site N10 était aussi efficace que IGISU dans l’inhibition des atn.
En outre, d’autres sites de glycosylation ont été renversés individuellement, à l’exception du site N8 critique pour l’expression de SU. Ces expériences ont indiqué que la plupart des glycanes, à l’exception de ceux du site N7, n’étaient pas impliqués dans les épitopes. Ensuite, les chercheurs ont exploré l’emplacement des épitopes nAb sur les sous-domaines SU. La suppression de la région centrale du RBD (RBDj) a nui à l’inhibition des nAb dans les échantillons de trois sujets, mais a été aussi efficace que IGISU contre atn en un.
De plus, trois boucles (L2, L3 et L4) du sous-domaine supérieur dans IGILes SU ont été retirés et évalués individuellement. La suppression de la boucle L3 a bloqué tous les échantillons spécifiques de GII sauf un, bien qu’avec une affinité plus faible. La délétion L2/L3 a eu différents effets dépendant de l’échantillon de plasma. Dans le sous-domaine inférieur, les résidus mutants dans le site de liaison aux glycosaminoglycanes sulfate d’héparane (HBS) ont eu un impact modeste sur l’activité des nAb.
Des investigations supplémentaires ont identifié la boucle 345-353 et l’hélice α8 comme épitopes majeurs sur GII RBD. L’équipe a appliqué une approche similaire en utilisant du plasma spécifique à l’IG et ICSU construit avec des mutations impactant les épitopes spécifiques de GII. Ils ont observé que les atn spécifiques à l’IG ciblaient les glycanes éliminés par l’endoglycosidase-H mais pas les glycanes complexes.
Suppression de RBDj ou L3 dans ICSU n’a pas réussi à bloquer les nAb. La délétion L2/L4 a eu des effets dépendants du plasma, similaires aux homologues GII. Ces données ont indiqué que les atn spécifiques aux GI et GII ciblent différents épitopes. De plus, la plupart des anticorps anti-SFV n’ont pas reconnu les peptides linéaires synthétiques couvrant les boucles supérieures du sous-domaine RBD.
Toutes les constructions SU ont été évaluées pour la liaison aux cellules humaines HT1080 hautement sensibles aux SFV de gorille/chimpanzé. L’élimination des glycanes dans les SU a amélioré la liaison cellulaire, tandis que la suppression de RBDj a diminué la capacité de liaison, qui était plus puissante dans GII que CI SU. Les SU mutants qui ont montré une liaison cellulaire ont été testés pour l’inhibition des nAb. Dans l’ensemble, un seul SU mutant n’a pas réussi à se lier aux cellules et à inhiber les attrapes.
conclusion
Les chercheurs ont découvert des régions épitopiques à travers le SFV SUvar reconnues par des nAb spécifiques à GII provenant d’humains infectés, avec au moins une reconnue par des nAb spécifiques à GI. Ils ont émis l’hypothèse que les nAb anti-SFV ciblent principalement les sites critiques pour la trimérisation d’Env, les changements conformationnels conduisant à la fusion membranaire et ceux impliqués dans la liaison cellulaire.
