Dans une étude récente publiée dans Recherche sur la thromboseles chercheurs ont déterminé les signatures plasmatiques des protéines apparentées ou dérivées des plaquettes dans l’embolie pulmonaire aiguë isolée (iPE) et l’EP associée à la thrombose veineuse profonde (TVP-EP), par rapport à la TVP isolée (iDVT).
Sommaire
Arrière plan
Les deux principaux sous-types de PE sont iPE et DVT-PE, et des études ont montré que les profils de protéines plasmatiques pour ces deux conditions diffèrent. Les plaquettes agissent comme des lieurs cellulaires facilitant la diaphonie inflammatoire entre les cellules immunitaires et endothéliales à un stress de cisaillement artériel élevé. Ce processus est une interaction directe médiée par les récepteurs impliquant des molécules pro-inflammatoires et des vésicules extracellulaires (VE). Cependant, les réponses inflammatoires locales au niveau de l’endothélium à faible contrainte de cisaillement activent les plaquettes pour initier le développement de la thromboembolie veineuse (TEV) et de ses sous-types, y compris l’EP et la TVP. Les mécanismes gouvernant ce processus sont moins bien compris.
Les données expérimentales suggèrent que les plaquettes contribuent à la thromboinflammation dans le système veineux en déclenchant des processus inflammatoires et de coagulation. Par exemple, en utilisant le modèle murin de TEV, les chercheurs ont montré que les plaquettes interagissent avec les cellules endothéliales exposant le facteur von Willebrand (VWF) et forment des conjugués avec les leucocytes via la glycoprotéine (GP) Ibα, ainsi qu’en déclenchant le recrutement endothélial et la coagulation dépendante des leucocytes. .
Des expériences humaines ont montré des propriétés différentielles d’activation et de réactivité des plaquettes dans la TEV aiguë. Par exemple, les plaquettes de patients TEV aigus présentaient plus d’exocytose de granules denses et de lysosomes. Il accompagnait des taux plasmatiques plus élevés de thromboxane B2 mais moins de génération de thrombine dépendante des plaquettes que les patients avec TEV exclu, indépendamment du traitement par l’aspirine.
Des études de spectrométrie de masse (MS) ont révélé plus de 3700 protéines dans des plaquettes humaines hautement purifiées au repos, inhibées et activées. Des tests avancés basés sur le dosage immuno-enzymatique (ELISA) avec la SEP pourraient permettre une évaluation qualitative des protéines libérées par les plaquettes dans le plasma et les plaquettes isolées. Pourtant, une analyse plus détaillée des protéines plasmatiques associées aux plaquettes dans les grandes cohortes de TEV fait défaut.
À propos de l’étude
Dans la présente étude de cohorte prospective multicentrique, les chercheurs ont dressé le profil du plasma prélevé sur 541 patients atteints de TEV à l’aide d’une analyse basée sur l’apprentissage automatique. L’objectif était d’identifier les signatures protéiques plasmatiques pour le relargage plaquettaire putatif, spécifique de l’iPE et de la DVT-PE. Ces patients avaient une TEV aiguë au moment de l’inscription, tel que diagnostiqué par imagerie. Alors qu’il y avait 99 patients iPE, 282 étaient des patients DVT-PE, et l’équipe a comparé leurs données avec 160 patients iDVT. L’équipe a utilisé l’échographie Doppler couleur de la jambe entière et l’angiographie pulmonaire par tomodensitométrie (TDM) pour les diagnostics de TVP et d’EP. Des angiologues et des radiologues certifiés ont jugé et validé tous les diagnostics de l’étude.
Ils ont collecté des échantillons d’étude dans le cadre du projet de génotypage et de phénotypage moléculaire de la thromboembolie veineuse (GMP-VTE) entrepris en Allemagne. Les chercheurs ont utilisé la technologie d’essai d’extension de proximité (PEA) pour le profilage des protéines plasmatiques à forte et faible abondance à partir d’échantillons stockés à -80 °C. Le PEA a récupéré les valeurs d’expression normalisée (NPX) pour toutes les protéines plasmatiques testées intégrant des anticorps marqués par des oligonucléotides et une amplification quantitative par réaction en chaîne par polymérase (PCR) en temps réel.
Le panel de dosage comprenait 444 protéines identifiées à partir de cinq bases de données [e.g., Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) and Gene Set Enrichment Analysis (GSEA) databases]. Après comparaison, l’équipe a finalement identifié 135 protéines liées aux plaquettes dans les cinq panels PEA pour une analyse plus approfondie.
Résultats de l’étude
La cohorte de l’étude a démontré une prévalence plus élevée d’hypertension artérielle, de diabète et de maladies inflammatoires chroniques, athérosclérotiques et cardiovasculaires dans l’iPE et la TVP-EP par rapport à l’iDVT. Les niveaux plus élevés de protéine C-réactive (CRP), de troponine I et de peptide natriurétique de type N-terminal (NT)-prohormone B (NT-proBNP) reflétaient de la même manière la plus grande charge cardiovasculaire dans les sous-types d’EP.
Les modèles de prescription de médicaments différaient en conséquence. Par exemple, le traitement antiplaquettaire, c’est-à-dire l’acide acétylsalicylique (AAS) et le clopidogrel, était surreprésenté chez les patients atteints d’EP. Une explication est que des médicaments antiplaquettaires prophylactiques sont prescrits en raison d’une suspicion d’infarctus du myocarde chez les patients atteints d’EP aiguë. Il est également possible qu’une activité plaquettaire variable existe entre les patients EP et iTVP car la proportion d’agents antiplaquettaires est plus élevée dans les groupes EP.
L’analyse d’apprentissage automatique de 135 protéines plaquettaires extraites par les modèles de régression logistique régularisés par l’opérateur de rétrécissement et de sélection le moins absolu (LASSO) a sélectionné 24 % et 22 % pour l’iPE et la DVT-PE, respectivement, ce qui reflétait des profils protéiques variables par rapport à l’iDVT. Notamment, les 135 protéines plaquettaires ont toutes démontré une bonne association avec six marqueurs d’activation plaquettaire, soutenant leur origine plaquettaire probable dans le plasma des patients atteints d’EP aiguë par rapport aux patients iDVT, analysés via les panels PEA. Contrairement à l’iPE, le facteur 1alpha dérivé des cellules stromales (SDF-1α) était fortement exprimé dans la DVT-PE que chez les patients iDVT, indiquant un rôle potentiellement distinct dans l’inflammation vasculaire et l’athérogenèse.
Dans l’iPE, l’analyse du réseau d’interaction protéine-protéine (PPI) a abouti à quatre groupes de jusqu’à six protéines interagissant fonctionnellement sur la base de 22 protéines liées aux plaquettes spécifiquement exprimées par rapport à l’iDVT. Le groupe principal était lié à l’adhésif, à la reconnaissance des formes et à la signalisation des récepteurs immunitaires. Celles-ci couvraient les kinases de la famille Src (SFK) c-Src, qui transfèrent la signalisation du ligand via les récepteurs plaquettaires associés au motif d’activation à base de tyrosine immunorécepteur (ITAM) (par exemple, la glycoprotéine VI [GPVI]).
Par rapport à l’iPE, DVT-PE a présenté un groupe de neuf protéines plasmatiques interagissant directement liées aux plaquettes impliquées dans le remodelage tissulaire et le trafic des leucocytes. Les inhibiteurs tissulaires des métalloprotéinases matricielles 1 (TIMP1) et TIMP4, principaux effecteurs du remodelage tissulaire, étaient plus fortement exprimés dans la DVT-PE que dans la iDVT et étaient sécrétés par les granules α plaquettaires.
Les auteurs ont noté que des taux plasmatiques plus élevés des deux inhibiteurs tissulaires de TIMP1 et TIMP4 étaient associés au diabète de type 2, à l’hypertension artérielle et à l’infarctus du myocarde, ce qui est conforme à la prévalence plus élevée d’événements cardiovasculaires majeurs dans la TVP-EP que dans la TVP i.
conclusion
Les résultats de l’étude actuelle ont révélé que les deux sous-types de PE présentaient des profils de protéines plasmatiques spécifiques associés aux plaquettes. Par exemple, l’étude a différencié une expression plus élevée de la P-sélectine dans le plasma des patients atteints de TVP-EP par rapport à l’iDVT, suggérant une relation avec la gravité de la maladie. Fait intéressant, la hauteur du pic de thrombine et l’agrégation plaquettaire spontanée dans le plasma riche en plaquettes étaient négativement liées dans l’iPE par rapport au phénotype iDVT. Ces résultats suggèrent qu’une réactivité plaquettaire plus faible in vitro pourrait être associée à une activation plaquettaire plus élevée in vivo pendant la phase aiguë de l’EP par rapport à l’iDVT. Plus important encore, ces résultats suggèrent que, bien que les sous-types de PE partagent certains points communs, ils présentent également des schémas d’activation plaquettaire différents.
Cette étude n’a pas abordé la quantification et la caractérisation de l’EV dans le plasma des phénotypes VTE. Chez les patients cancéreux, la TEV pourrait être liée à une augmentation des taux plasmatiques de microparticules. Cependant, chez les patients non cancéreux, une augmentation significative des microparticules dérivées des plaquettes n’a été observée qu’avec la TEV récurrente par rapport aux donneurs de sang sains. Les études futures devraient élucider la distribution des EV dans les différents phénotypes VTE. Des études supplémentaires sont également nécessaires pour préciser l’impact des différents types de cellules sur la libération de protéines dérivées des plaquettes dans le PE.
En conclusion, les données de l’étude ont indiqué que l’iPE et la DVT-PE présentaient des signatures plasmatiques spécifiques mais variables impliquées dans l’immunothrombose liée aux plaquettes et les processus thrombo-inflammatoires par rapport à l’iDVT. De plus, les profils des protéines d’activation plaquettaire semblaient différer entre les sous-types de PE, avec une prépondérance des protéines sécrétées dans la DVT-PE par rapport aux protéines plus susceptibles d’être libérées dans le plasma par l’EV dans l’iPE. Dans l’ensemble, les plaquettes contribuent à réguler des niveaux distincts de protéines plasmatiques dans la phase aiguë de l’EP, différant entre les sous-types d’EP.
