Oncotarget publié « La réduction induite par le décalage du cadre de lecture du gain de fonction p53 R273H et la suppression de l’extrémité C-terminale R273H dans les cellules cancéreuses du sein entraînent une sensibilité au stress de réplication » qui a rapporté que ces auteurs ont récemment documenté que le mutant à gain de fonction p53 R273H dans les cellules de cancer du sein triple négatif interagit avec l’ADN répliquant et PARP1. Le faux-sens R273H GOF mtp53 a un domaine de liaison à l’ADN central muté qui le rend incapable de se lier spécifiquement à ADN, mais conserve la capacité d’interagir étroitement avec la chromatine.
Le domaine C-terminal et le domaine d’oligomérisation des protéines GOF mtp53 sont intacts et il n’est pas clair si ces régions de mtp53 sont responsables des activités de réplication de l’ADN basées sur la chromatine.
Ceux-ci comprenaient un décalage de cadre mtp53 R273Hfs387, qui appauvrit l’expression de la protéine mtp53 ; mtp53 R273HΔ381-388, qui avait une petite délétion dans le CTD ; et mtp53 R273HΔ347-393, qui avait à la fois les régions OD et CTD tronquées.
Le mtp53 R273HΔ347-393 existait exclusivement sous forme de monomères et a perturbé l’interaction de la chromatine du mtp53 R273H.
Pris ensemble ces Oncotarget les résultats montrent que les domaines CTD et OD de mtp53 R273H jouent des rôles critiques dans le mutant p53 GOF qui appartiennent aux processus associés à la réplication de l’ADN.
La protéine suppresseur de tumeur p53 est bien connue en tant que facteur de transcription, mais p53 possède également des fonctions indépendantes de la transcription.«
Dr Jill Bargonetti
Alors que les protéines mtp53 faux-sens dérivées de tumeurs ont des fonctions altérées, elles contiennent les deux domaines de transactivation N-terminaux, suivis d’un domaine riche en proline, d’un domaine de liaison à l’ADN central altéré, et du domaine d’oligomérisation et du domaine régulateur C-terminal.
Ici, ils examinent en outre la capacité de mtp53 R273H et de ses régions OD et CTD à influencer la prolifération cellulaire, la réplication de l’ADN et la progression du cycle cellulaire des cellules cancéreuses du sein.
Le choix d’étudier un rôle potentiel pour les domaines OD et CTD dans le contexte de l’allèle mtp53 R273H était double :
- Ils ont délimité la voie GOF ci-dessus dans ce contexte et, parallèlement aux études rapportées, ont travaillé pour générer plus d’outils pour élucider le rôle de chaque domaine dans l’activité GOF de mtp53 ;
- Leur poursuite d’une approche génétique utilisant la technologie CRISPR-Cas9 pour créer des altérations spécifiques dans chaque domaine a nécessité que nous nous concentrions d’abord sur une lignée cellulaire exprimant mtp53 R273H.
Ils ont constaté qu’une mutation de décalage du cadre de lecture dans l’extrémité C-terminale de mtp53 réduisait les niveaux de protéine mtp53 R273H stables par rapport aux cellules parentales MDA-MB-468, réduisait la prolifération cellulaire et réduisait l’association à la chromatine des protéines de réplication qui reflétaient leur lente progression à travers S- phase.
Le ciblage CRISPR-Cas9 a également produit des clones cellulaires avec des protéines mtp53 R273H tronquées C-terminales ; de telles cellules avec mtp53 R273H tronqué ont montré une prolifération réduite par rapport aux cellules parentales mais ont progressé jusqu’à la phase S d’une manière similaire.
L’équipe de recherche Bargonetti a conclu dans leur Oncotarget Résultat de la recherche que leurs études actuelles n’indiquent pas une fonction spécifique exécutée par les domaines OD et CTD en réponse à la thymidine ; cependant, ils peuvent montrer que leur perte n’a pas d’impact sur l’assemblage réplisome au début de la phase S tel que mesuré par le chargement de chromatine PCNA et ils aborderont cette découverte à l’avenir.
Ainsi, les fonctions des domaines OD et CTD sont en corrélation avec les événements postérieurs à l’entrée en phase S, contrairement à cette fonction conférée par d’autres domaines p53 déficients dans la lignée cellulaire mtp53fs387, dont la perte empêche l’entrée en phase S. Bien qu’actuellement les auteurs soient incapables d’articuler les rôles précis de ces régions distinctes de p53 en réponse à la thymidine, leurs études suggèrent qu’elles peuvent fonctionner à des stades temporellement distincts de la phase S.
