Une entrevue avec le Dr Will Howat d'Abcam au SfN 2018, discutant des possibilités et des défis de l'immunohistochimie (IHC) au-delà d'une seule couleur!
Sommaire
D'après votre expérience, dans quelle mesure l'utilisation de l'IHC est-elle répandue aujourd'hui? Qu'apporte-t-il en termes de connaissances biologiques?
L'IHC est tout aussi répandu maintenant qu'il l'a été pendant de nombreuses années, sinon plus. Il est utilisé dans tous les domaines, et en particulier dans les neurosciences – que ce soit sous la forme d'un matériau fixe, de coupes cérébrales flottantes ou de coupes FibroDerm de 50 microns d'épaisseur – il y a tellement d'applications différentes.
Carl Dupont | Shutterstock
Par exemple, dans le domaine de la biologie du cancer, nous pouvons utiliser l'IHC pour identifier les types de cellules qui interagissent les uns avec les autres. De plus, dans le domaine des neurosciences, nous pouvons utiliser l'IHC pour différencier les neurones endommagés qui expriment des marqueurs de surface cellulaire particuliers des neurones sains dans des régions spécifiques du cerveau.
Essentiellement, l'IHC fournit des données spatiales que vous ne pouvez pas obtenir à partir d'analyses telles que l'analyse d'ADN ou l'analyse de protéines. Il est essentiel pour pouvoir regarder à travers un échantillon de tissu entier et identifier la présence de marqueurs de surface cellulaire.
Quels sont, selon vous, les obstacles à une adoption plus large de l'IHC multicolore?
Le principal obstacle à l'IHC multicolore est de savoir quelle technique utiliser et d'aligner cette technique avec la bonne technologie.
La réalisation d'IHC en utilisant quatre couleurs est assez simple. Cependant, aller au-delà de cela nécessite un équipement spécialisé et une compréhension approfondie de la façon dont vous allez effectuer la coloration. Par exemple, vous devez aligner votre technique avec des anticorps de haute qualité et élaborer une méthode de coloration.
Il existe de nombreuses façons différentes de procéder, telles que la décoloration et les méthodes de coloration. Mais, la répétition de l'imagerie signifie que vous devez assembler l'image finale ensemble, ce qui nécessite que la technique fonctionne de manière transparente pour éviter les artefacts.
C’est pourquoi nous sommes tout à fait enthousiasmés par certaines des nouvelles technologies qui permettent d’effectuer une IHC multicolore en utilisant une seule tache, suivie de l’imagerie. Le problème est que vous avez besoin d'un équipement spécialisé. L'accès à l'équipement peut être un obstacle majeur à une adoption plus large.
Chez Abcam, nous fournissons des protocoles et des guides qui permettront à l'utilisateur de s'appuyer sur les méthodes avec lesquelles il est déjà à l'aise. Nous fournissons des conseils sur ce qui fonctionne bien et ce qui ne fonctionne pas et suggérons d'autres options à explorer, notamment s'ils pourraient conjuguer leurs propres anticorps, par exemple. Il s'agit de donner aux gens des conseils et des guides supplémentaires pour les aider en cours de route.
Carl Dupont | Shutterstock
Dans le domaine des neurosciences en particulier, comment voyez-vous l'IHC améliorer la compréhension des maladies et des conditions complexes?
L'IHC est une technique bien établie dans le domaine des neurosciences. Il peut être appliqué à des échantillons de cerveau entier, des coupes flottantes, des tissus enrobés de paraffine et même des échantillons cryoconservés. Il est utilisé dans tous les domaines.
C'est particulièrement utile pour les chercheurs qui essaient de comprendre la connectivité des neurones dans la maladie; où cela ne va-t-il pas et comment ces anticorps pourraient-ils démontrer la variabilité entre des états normaux et des états pathologiques tels que la maladie d'Alzheimer, par exemple? Sans cette information spatiale, il est très difficile de comprendre la physiopathologie de ces maladies.
Si vous pouviez offrir aux lecteurs intéressés à utiliser IHC un conseil clé, quel serait-il?
En fin de compte, l'IHC multicolore doit être validé. C'est quelque chose sur lequel Abcam travaille activement. Nous devons être sûrs que les anticorps que nous fournissons se lient à la bonne cible et n'ont aucune interaction hors cible qui créerait un bruit de fond. Pour ce faire, nous mettons autant de contrôles que possible dans le processus afin d'être sûrs que les anticorps sont dans la bonne cellule, dans le bon compartiment et liés à la bonne protéine.
Où les lecteurs peuvent-ils trouver plus d'informations?
À propos du Dr Will Howat
Will Howat a rejoint Abcam en août 2018 et est responsable de la direction de l'équipe d'imagerie et d'immunohistochimie.
Avant de rejoindre Abcam, Will a travaillé chez AstraZeneca en tant que chef d'équipe du groupe de pathologie moléculaire, où son équipe a développé des tests de biomarqueurs pour les essais cliniques précliniques, de phase 1 et de phase 2. Il a également travaillé au Welcome Trust Sanger Institute au sein de l'Atlas of Protein Expression, où il était responsable de la R&D pour le groupe Immunohistochimie.
Will mettra en place et dirigera le centre d'histopathologie / ISH du Cancer Research UK Cambridge Institute pendant 9 ans.
Il a un B.Sc. (Hons) en immunologie et pharmacologie de l'Université de Strathclyde et d'un doctorat. en pathologie de l'Université de Southampton.
Il est le premier auteur de publications dans le Lancet, American Journal of Pathology et Journal de pathologie ainsi que les publications de co-auteurs dans Nature, Science, Nature Genetics, et le Journal of Experimental Medicine.
