Dans une récente étude publiée sur bioRxiv* serveur de préimpression, les chercheurs ont confirmé que l’infection par le coronavirus félin (FCoV) induisait la production d’anticorps à réaction croisée contre le domaine de liaison au récepteur (RBD) du coronavirus 2 du syndrome respiratoire aigu sévère (SRAS-CoV-2) chez les chats domestiques, malgré une séquence minimale d’acides aminés similarité acide (aa) entre les RBD du SRAS-CoV-2 et le FCoV de sérotype 1 (FCoV1) et de sérotype 2 (FCoV2).
Les études n’ont pas encore signalé de sérums de chats infectés par le FCoV possédant une immunité de protection croisée avec les RBD SARS-CoV-1 ou SARS-CoV-2. Sur la base du rapport du laboratoire de recherche des auteurs, les toms SPF (exempts d’agents pathogènes spécifiques) ont développé de manière inattendue des anticorps anti-SARS-CoV-2 RBD à protection croisée lors de l’accouplement avec des reines infectées par le FCoV.
À propos de l’étude
Dans la présente étude, les chercheurs ont réalisé la présente étude pour confirmer les résultats antérieurs de l’induction d’anticorps anti-SARS-CoV-2 RBD à protection croisée parmi les toms SPF infectés par le FCoV.
Des chats japonais ont été inoculés par voie nasale/orale avec les souches FCoV2 79-1146 ou FCoV1 UK-1, et leurs échantillons de sérum ont été obtenus après 60 jours et 15 mois d’inoculation. Quatre reines [University of Georgia (UGA)-Q1, Q2, Q3, and Q4] ont été obtenus, et les reines qui s’accouplaient ont produit de jeunes chats avec des mâles de laboratoire exempts d’agents pathogènes spécifiques (n = 3). Les chats hébergés en groupe (n = 8) ont été considérés comme non apparentés aux toms UF (Université de Floride) et aux reines UGA. Les peptides SARS-CoV-2 tels que MB-RBD (MassBiologics-RBD) et UF-RBD et les lignées cellulaires telles que Fc9 (Felis catus 9), Fcwf-4 (Felis catus whole fetus-4) et le rein félin Crandell (CrFK ) fibroblastes ont été utilisés pour des expériences de culture cellulaire.
Des cellules CrFK ont été inoculées avec la souche FCoV2 79-1146 pour produire FCoV2 pour in vitro analyses et stock FCoV2 WV (virus entier). Par la suite, des expériences de transfection ont été réalisées, des plasmides RBD ont été exprimés dans des cellules Expi293F et les protéines RBD ont été purifiées. En outre, des dosages immuno-enzymatiques FCoV-WV et SARS-CoV-2 RBD (ELISA) ont été effectués avec une incubation sérique d’une nuit. Pour s’assurer que la réactivité ELISA sérique était spécifique au FCoV2-WV, FCoV-RBD ou SARS-CoV-2 RBD, le sérum des toms (n = 3) et des reines UGA (n = 4) a été incubé séparément à des dilutions similaires pour une heure seulement (ELISA rigoureux).
De plus, l’analyse de gel SDS-PAGE, les analyses d’immunoblot, les tests d’anticorps neutralisants anti-FCoV2 (NAb) et in vitro Des tests de blocage de l’infection FCoV2 avec SARS-CoV-2 RBD ont été effectués. Les réponses immunologiques de l’interféron gamma à médiation cellulaire (IFNγ) au SARS-CoV-2 RBD ont été évaluées. Les cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC) de chats infectés temporairement (4GC) et chroniquement (G-3) par FCoV1 et de deux chats SPF (4GA, 2FB) ont été stimulées avec FCoV1, FCoV2 ou SCoV2 RBD.
Les séquences de la souche RBD de SARS-CoV-2 Wuhan-Hu-1 et de quatre souches de FCoV1 et FCoV2 ont été alignées par plusieurs analyses d’alignement de séquences. Les reines de l’UGA ont été co-hébergées et leurs premiers échantillons de sérum ont été obtenus 24 jours plus tard, indiquant une forte probabilité que les reines soient infectées par le FCoV et non par le SRAS-CoV-2 d’un gardien positif au SRAS-CoV-2. étant donné que le premier cas d’infection par le SRAS-CoV-2 a été détecté en Floride trois mois plus tard, le 2 mars 2022.
Résultats
Toutes les reines UGA étaient positives au FCoV-2 et les sérums des mâles accouplés présentaient une faible séropositivité au FCoV2 sans aucun anticorps anti-FCoV2. Trois des quatre échantillons de sérum de chat juvénile ont montré une réactivité croisée modérée du SARS-CoV-2 RBD. Le sérum maximal d’UGA-Q2 et des trois chats tom a fortement réagi de manière croisée avec le SARS-CoV-2 RBD mais n’a pas montré de réactivité croisée FCoV2 spike (S) RBD dans les tests ELISA et les analyses d’immunotransfert. Aucune des reines, des toms ou des chatons n’a généré d’anticorps anti-FCoV2, indiquant que les chats étaient infectés par le FCoV1, ce qui a été confirmé par une analyse par immunotransfert.
Les sérums de chats positifs au FCoV2 79-1146, mais pas les sérums positifs au FCoV1 KU-2, ont fortement réagi de manière croisée avec le SARS-CoV-2 RBD, ce qui indique que tous les chats infectés par le FCoV1 n’ont pas développé d’anticorps protecteurs croisés contre le SARS-CoV-2 RBD. La séquence de 12 acides aminés au niveau de la région carboxyl-terminale du SARS-CoV-2 MB RBD était similaire aux séquences FCoV. Les huit chats de laboratoire hébergés en groupe sans lien avec les toms ont été testés positifs au FCoV2 par ELISA et analyses immunoblot. La plupart des chats avaient des anticorps à protection croisée contre le SARS-CoV-2 RBD, qui ont été conservés même après 15 mois. Les chats comprenant FLA (antigène leucocytaire félin) ont maintenu des titres d’anticorps anti-SARS-CoV-2 RBD à protection croisée plus élevés.
Même si les quatre chattes reines UGA, y compris UGAQ2, ont montré une réactivité FCoV2 S, deux des trois toms manquaient de réactivité croisée FCoV2 S. Les RBD SARS-CoV-1 et SARS-CoV-2 ont montré une similitude de 88 % et une identité de 65 % et, par conséquent, l’observation de chats positifs au FCoV développant des anticorps à protection croisée contre le RBD SARS-CoV-2 malgré l’absence d’anticorps contre le SARS-CoV- 1 La sous-unité 1 S (S1) était inattendue. Les résultats ont indiqué que le SARS-CoV-2 RBD et le FCoV2 RBD étaient antigéniquement et structurellement similaires. SARS-CoV-2 UF RBD à des concentrations élevées pourrait assurer une protection croisée contre les infections au FCoV2 à des doses RBD non toxiques de 48,0 μg/mL à 68,0 μg/mL.
Remarquablement, les PBMC des chats infectés par FCoV1 et FCoV-2 (en particulier 4GC et G-3) ont reconnu le SARS-CoV-2 RBD en générant de l’IFNγ en réponse à la stimulation. Cependant, seuls les chats infectés de manière chronique ont reconnu la stimulation FCoV1 RBD. Les séquences CCoV2 (canine CoV sérotype 2) RBD et FCoV2 RBD ont montré une similitude de 96 % et une identité de 88 %. Les séquences FCoV1 RBD et CCoV1 RBD ont montré une similitude de 81 %, indiquant une lignée similaire avec quelques modifications évolutives.
Dans l’ensemble, les résultats de l’étude ont mis en évidence la capacité des RBD SARS-CoV-2 et FCoV2 à bloquer les infections au FCoV2 in vitro et générer des réponses des lymphocytes T ciblées par pan-coronavirus. Les résultats ont indiqué qu’un vaccin pan-CoV pourrait être développé contre les infections par le SRAS-CoV-2 chez les chiens, les chats et les hamsters en fusionnant les RBD du FCoV1 [glycoprotein 52 (gp52)] et FCoV2 (gp59) avec celle du SARS-CoV-2 (gp40), sans intégrer potentiellement celles de CCoV1 et CCoV2.
*Avis important
bioRxiv publie des rapports scientifiques préliminaires qui ne sont pas évalués par des pairs et, par conséquent, ne doivent pas être considérés comme concluants, guider la pratique clinique/les comportements liés à la santé, ou traités comme des informations établies.
