*Avis important: medRxiv publie des rapports scientifiques préliminaires qui ne sont pas évalués par des pairs et, par conséquent, ne doivent pas être considérés comme concluants, guider la pratique clinique/les comportements liés à la santé, ou traités comme des informations établies.
Dans une récente étude publiée sur medRxiv* serveur de préimpression, des chercheurs de l’Université de Caroline du Nord et des National Institutes of Health ont déterminé les associations entre le coronavirus 2 du syndrome respiratoire aigu sévère oral (SRAS-CoV-2), les anticorps oraux contre le SRAS-CoV-2 et la maladie à coronavirus 2019 ( Symptômes du covid-19.
Étude : Les réponses orales de l’hôte SARS-CoV-2 prédisent l’évolution précoce de la maladie COVID-19. Crédit d’image : Kittyfly/Shutterstock
Arrière-plan
Le SRAS-CoV-2, l’agent causal du COVID-19, se réplique dans les voies respiratoires supérieures, la muqueuse buccale, les glandes salivaires et la muqueuse respiratoire. La présence de récepteurs de l’enzyme de conversion de l’angiotensine 2 (ACE2) et la détection de l’acide ribonucléique (ARN) du SRAS-CoV-2 et du SRAS-CoV-2 virulent dans la cavité buccale indiquent que le SRAS-CoV-2 prolifère dans la cavité buccale. Alors que les réponses anti-SARS-CoV-2 déterminées par le test de flux latéral (LFA) dans la cavité buccale dénotent une immunité systémique, les biomarqueurs oraux en tant qu’indicateurs du pronostic COVID-19 n’ont pas été explorés de manière significative.
À propos de l’étude
Dans la présente étude, les chercheurs ont évalué la détection du SRAS-CoV-2 et les réponses immunitaires humorales de l’hôte dans la cavité buccale.
Des échantillons de lavage de gorge et de salive ont été obtenus de 47 individus symptomatiques (n = 17) et asymptomatiques (n = 30), pour lesquels le diagnostic de COVID-19 a été confirmé à l’aide d’une réaction quantitative en chaîne par polymérase à transcription inverse (RT-qPCR) en analysant le nasopharynx (NP ) écouvillons. Dans le groupe asymptomatique, 15 personnes ont montré une séropositivité au SRAS-CoV-2, et les autres étaient séronégatives ou non infectées. La protéine de la nucléocapside (N) du SRAS-CoV-2 a été détectée à l’aide d’essais d’immunotransfert.
La réaction en chaîne quantitative de transcription inverse-polymérase ciblant les séquences d’acide ribonucléique sous-génomique (sgRNA) du SARS-CoV-2 a été confirmée par le séquençage de Sanger, et la LFA a été réalisée pour déterminer le domaine de liaison au récepteur de protéine anti-SARS-CoV-2 spike (S) ( RBD) titres d’immunoglobuline G (IgG) et d’IgM. De plus, une analyse structurelle a été effectuée pour identifier des molécules dans la salive de l’hôte similaires à l’antigène de la nucléocapside du SRAS-CoV-2.
La gravité de la COVID-19 a été classée à l’aide des directives de traitement de la maladie à coronavirus 2019 de l’institut national de la santé (NIH). Des produits de réaction en chaîne par polymérase sous-génomique de longueur complète codant pour les glycoprotéines SARS-CoV-2 de pointe, de nucléocapside, d’enveloppe (E) ou de membrane (M) ont été générés à partir de la teneur totale en acide ribonucléique SARS-CoV-2-positive dans la salive. L’acide désoxyribonucléique complémentaire (ADNc) a été transfecté dans des kératinocytes oraux normaux humains (NOK) et 48 heures après la transfection, une analyse par immunotransfert a été effectuée.
La structure cristalline du domaine de liaison à l’acide ribonucléique N-terminal de l’antigène de la nucléocapside du SRAS-CoV-2 a été évaluée de manière comparative avec des structures accessibles au public téléchargées dans la base de données de modélisation moléculaire (MMDB). Les échantillons de cavité buccale comprenant plus de 10,0 copies d’ARN par réaction RT-qPCR ont été considérés comme positifs pour le SRAS-CoV-2. Les symptômes du COVID-19, y compris les douleurs musculaires, la faiblesse, l’anosmie, les nausées, l’agueusie, les symptômes des voies respiratoires supérieures, l’essoufflement, la toux, la congestion nasale, les maux de gorge et les écoulements de la cavité nasale, ont été évalués.
Résultats
L’âge moyen des participants à l’étude était de 40 ans, avec une répartition égale entre les sexes. Au début de l’étude, l’analyse par immunotransfert a confirmé la présence d’antigène SARS-CoV-2 N détectée par LFA dans 82,0 % des lavages de gorge. Cependant, seuls trois et 17 échantillons de salive et lavages de gorge, respectivement, étaient positifs pour le SRAS-CoV-2 par RT-PCR. Après quatre semaines, 60,0 % et 83,0 % des échantillons de salive et des lavages de gorge, respectivement, ont montré une présence persistante d’antigène de la nucléocapside du SRAS-CoV-2.
Le signal d’analyse du flux latéral de l’antigène de la nucléocapside du SRAS-CoV-2 parmi trois individus SARS-CoV-2-négatifs a indiqué une identification croisée probable de quatre molécules de protéine de liaison à l’acide ribonucléique salivaire structurellement similaires [alignment 19 to 29 amino acid, root mean square deviation (RMSD) 1.0 to 1.5 Å]. Au début de l’étude, les patients symptomatiques présentaient des jonctions d’acide ribonucléique sous-génomiques liées à la prolifération et des titres d’IgG (94 % et 100 % des échantillons de salive et des bains de gorge, respectivement) et des titres d’IgM (75 % et 63 % des échantillons de salive et des bains de gorge, respectivement). ).
À quatre semaines, les titres d’immunoglobuline G anti-SARS-CoV-2 ont persisté dans 100 % des échantillons de salive et 83 % des lavages de gorge, et les titres anti-IgM ont persisté dans 80 % des échantillons de salive et 67 % des lavages de gorge. Les titres oraux d’IgG anti-SARS-CoV-2 ont montré une corrélation de 100 % avec les résultats de RT-qPCR analysés par écouvillonnage nasopharyngé. La gravité de la fatigue et de la toux et la présence de faiblesse, de nausées et de symptômes des voies respiratoires supérieures étaient inversement liées aux titres d’immunoglobuline orale IgM anti-SARS-CoV-2, qui étaient plus importants chez les femmes que chez les hommes. L’évaluation longitudinale des patients COVID-19 symptomatiques a indiqué la persistance orale du SRAS-CoV-2. Les symptômes et la gravité du COVID-19 étaient corrélés aux titres d’anticorps oraux anti-SARS-CoV-2 et à la présence de SARS-CoV-2.
Les résultats fournissent de nouvelles informations sur les biomarqueurs oraux du pronostic COVID-19, de la transmission et de la persistance du SRAS-CoV-2. La présence de SARS-CoV-2 a été détectée dans les fluides oraux d’individus positifs pour la RT-qPCR analysés par écouvillonnage nasopharyngé à l’aide de plusieurs méthodes de détection basées sur la RT-qPCR, y compris (i) trois paires distinctes d’amorces ciblant le cadre de lecture ouvert 3a (ORF3a)-, ou régions codant pour la nucléocapside du génome du SRAS-CoV-2 ; (ii) le nombre de copies d’acide ribonucléique en termes absolus ; et (iii) l’acide ribonucléique sous-génomique, un biomarqueur de la réplication active du SRAS-CoV-2 dans la période initiale de l’infection symptomatique par le SRAS-CoV-2.
Dans l’ensemble, les résultats de l’étude ont montré que, critiques pour la transmission du SRAS-CoV-2 et l’évolution du COVID-19, la prolifération et la persistance du SRAS-CoV-2 dans la cavité buccale ont démontré des associations claires avec des symptômes particuliers du COVID-19, des titres précoces d’immunoglobulines et sexe du participant lors de l’infection initiale. La réactivité croisée de l’antigène de la nucléocapside pourrait représenter le mimétisme de protéines de cellule hôte structurellement similaires.
*Avis important: medRxiv publie des rapports scientifiques préliminaires qui ne sont pas évalués par des pairs et, par conséquent, ne doivent pas être considérés comme concluants, guider la pratique clinique/les comportements liés à la santé, ou traités comme des informations établies.
