Environ 300 millions de personnes dans le monde sont infectées de manière chronique par le virus de l’hépatite B (VHB) et présentent un risque élevé de développer une cirrhose du foie ou un carcinome hépatocellulaire. Par conséquent, il existe un besoin urgent de développer des thérapies curatives contre le VHB. Cependant, en raison de la stratégie de réplication unique du virus HB, la quantification de l’ADN viral dans les cellules hépatiques infectées, qui est essentielle dans les études précliniques et cliniques, est techniquement difficile et non standardisée. Un consortium de recherche international dirigé par des scientifiques du DZIF a maintenant développé des recommandations pour l’optimisation, le contrôle et la validation des mesures quantitatives de l’ADN viral, qui pourraient être cruciales pour l’évaluation préclinique et clinique des stratégies thérapeutiques.
Le VHB est un virus à ADN qui infecte spécifiquement les hépatocytes humains. Après infection, le génome d’ADN du virus est converti par des enzymes cellulaires en ADN circulaire fermé de manière covalente (cccDNA), qui forme des mini chromosomes stables dans les noyaux cellulaires par association avec des protéines chromosomiques cellulaires. Sous cette forme, l’ADN viral sert alors de matrice pour la formation de nouvelles particules virales. Une limitation majeure de la recherche préclinique et clinique sur le VHB est le manque de méthodes normalisées basées sur la PCR pour la quantification spécifique de l’ADN viral présent sous forme d’ADNccc dans les échantillons infectés par le VHB. Dans le cadre d’un consortium international soutenu par la Coalition internationale pour éliminer le VHB (ICE-HBV), les scientifiques du DZIF du Centre médical universitaire de Hambourg-Eppendorf, de l’Université de Heidelberg et de l’Université technique de Munich ont collaboré avec l’Agence nationale de recherches française. sur le sida et les hépatites virales (ANRS) et ses collègues de Gilead Sciences aux États-Unis pour comparer les protocoles et élaborer des conseils sur les meilleures pratiques fondés sur des données probantes pour quantifier l’ADNccc par PCR quantitative.
« En comparant différents protocoles de quantification de l’ADN du VHB dans des échantillons de tissus, nous avons constaté que la coexistence de différentes formes d’ADN viral ainsi que les conditions de conservation et de traitement des échantillons affectent fortement la quantification par PCR de l’ADN ccc du VHB », déclare le jeune chercheur du DZIF, le Dr Lena. Allweiss, qui a dirigé la collaboration des six laboratoires participants. Sur la base des résultats de l’étude, l’équipe a développé des recommandations méthodologiques adaptées au type d’échantillon pour l’optimisation, le contrôle et la validation de la mesure quantitative de l’ADN ccc du VHB.
« L’étude aidera les programmes de recherche sur la guérison du VHB visant à évaluer l’impact des thérapies sur le réservoir cellulaire du VHB dans les études précliniques et les essais cliniques », résume le professeur principal de l’étude, le professeur Maura Dandri, scientifique du DZIF au centre médical universitaire de Hambourg-Eppendorf, les résultats de l’étude.
