Dans une étude récente publiée dans msphèreles chercheurs ont développé un test immuno-enzymatique bloquant à base d’anticorps monoclonaux (mAb) (bELISA) pour détecter le coronavirus 2 du syndrome respiratoire aigu sévère (SRAS-CoV-2) chez les animaux.
Arrière-plan
Les tests de diagnostic actuels du SARS-CoV-2 sont basés sur des anticorps hôtes ou des acides nucléiques viraux. Le SRAS-CoV-2 montre une large gamme d’hôtes ; outre les humains, le virus peut infecter divers animaux, tels que les chats, les lions, les tigres, les cerfs, les visons, les chiens et les léopards des neiges. Ceci est préoccupant, étant donné le potentiel de transmission de l’homme à l’animal et vice versa.
Cela présente également des défis pour le développement de tests d’anticorps car la disponibilité commerciale de réactifs d’anticorps secondaires spécifiques à l’hôte est limitée. Contrairement à l’ELISA classique, bELISA peut détecter des anticorps indépendants des anticorps secondaires spécifiques à l’hôte. Les rapports suggèrent que bELISA atteint des niveaux de sensibilité similaires à ceux de l’ELISA conventionnel et a une spécificité accrue.
L’étude et les conclusions
Dans la présente étude, les chercheurs ont généré un panel de mAb anti-SARS-CoV-2 et développé un bELISA basé sur mAb pour détecter la séroconversion chez les animaux. Le gène de la nucléocapside (N) de la souche SARS-CoV-2 Wuhan a été cloné et exprimé par recombinaison. Des souris ont été immunisées avec la protéine recombinante pour générer des mAb spécifiques. Quatre mAb (41-10, 86-12, 127-3 et 109-33) ont été obtenus.
Les chercheurs ont en outre inclus un mAb précédemment décrit (B61G11). Le dosage immunofluorescent (IFA) a révélé la capacité des cinq mAb à reconnaître la protéine N. De plus, les mAb ont affiché des réactivités variables aux cellules Vero infectées par le SRAS-CoV-2 WA.1, B.1, P.1, B.167.2 ou B.1.1.7. les mAb, B61G11 et 127-3 avaient une forte réactivité, tandis que 109-33 présentaient une faible réactivité ; d’autres mAb avaient une réactivité modérée.
Ensuite, l’équipe a évalué la réactivité croisée des mAb avec des CoV communs d’espèces sensibles au SRAS-CoV-2. Les protéines N ont été exprimées à partir de deux CoV canins (CCoV), de quatre CoV humains (HCoV) et de deux CoV félins. L’IFA a révélé la réactivité croisée de 86-12 avec les protéines N du SARS-CoV-1, du HCoV-NL63 et du CCoV de type 1, et du B61G11 avec le SARS-CoV-1 N. Les mAb restants n’ont pas montré de réactivité croisée avec N protéines de ces CoV.
En outre, les auteurs ont sélectionné le mAb, 127-3, pour développer bELISA, étant donné sa forte réactivité aux variants du SARS-CoV-2 et son incapacité à réagir de manière croisée avec les CoV courants ou le SARS-CoV-1. Ils ont établi des normes sériques à l’aide d’échantillons de 24 chats 14 jours après l’infection par le SRAS-CoV-2 ; cela a servi de contrôle positif. De même, des sérums de chats SARS-CoV-2-négatifs ont servi de contrôle négatif.
Les contrôles positifs ont été stratifiés en normes positives élevées, moyennes et faibles basées sur la densité optique dans ELISA indirect. L’équipe a optimisé les conditions de bELISA en utilisant les sérums de contrôle. Après optimisation, le pourcentage d’inhibition (PI) de bELISA variait de 75 % à 85 %, 55 à 65 % et 35 % à 45 % pour les contrôles positifs élevés, moyens et faibles, respectivement. bELISA PI était d’environ 0 % pour le contrôle négatif.
Ensuite, des normes de contrôle négatives et hautement positives ont été utilisées pour estimer la sensibilité analytique. Une différence statistique entre les contrôles positifs et négatifs était évidente à la dilution la plus élevée, 1:128. Cependant, la dilution 1:4 a maximisé la distinction entre les résultats négatifs et positifs tout en minimisant les interférences de fond et a donc été sélectionnée.
La sensibilité et la spécificité de bELISA ont été évaluées à l’aide d’échantillons avec un statut d’anticorps connu. Un seuil bELISA PI de 17,6 % a donné une sensibilité et une spécificité maximales de 97,8 % et 98,9 %, respectivement. L’aire sous la courbe caractéristique de fonctionnement du récepteur était de 0,998, ce qui implique une précision bELISA élevée. De plus, les auteurs ont confirmé la reproductibilité du test en utilisant des sérums de contrôle positifs au milieu.
L’équipe a exploré la dynamique des réponses anti-N chez les chats infectés par le SRAS-CoV-2 B.1, Delta ou Omicron. Les sérums ont été obtenus à plusieurs moments. Le test a détecté une réponse anti-N sept jours après l’infection (dpi) pour l’infection Delta ou B.1 et 14 dpi pour l’infection Omicron. La réponse anticorps la plus élevée a été observée pour l’infection Delta. De plus, trois chiens d’une clinique pour animaux de compagnie qui présentaient des symptômes respiratoires ont été testés à l’aide de bELISA. Deux chiens étaient positifs pour les anticorps contre le SRAS-CoV-2.
conclusion
Pour résumer, les chercheurs ont développé un panel de mAb anti-protéine N et sélectionné un mAb approprié (127-3) pour développer bELISA. Ce mAb a démontré une forte réactivité à plusieurs variants du SARS-CoV-2 sans réaction croisée avec les protéines N des CoV communs ou du SARS-CoV-1, conduisant à une spécificité élevée du test (98,9 %). Le test était également très sensible (97,8 %), similaire aux tests sérologiques commerciaux, et pourrait être utile dans la surveillance du COVID-19 dans les populations animales et l’identification des réservoirs potentiels.
