*Avis important: bioRxiv publie des rapports scientifiques préliminaires qui ne sont pas évalués par des pairs et, par conséquent, ne doivent pas être considérés comme concluants, guider la pratique clinique/les comportements liés à la santé, ou traités comme des informations établies.
Dans une récente étude publiée sur bioRxiv* serveur de préimpression, des chercheurs de l’Université du Texas MD Anderson Cancer Center ont développé des anticorps bispécifiques entièrement humains qui se lient à deux épitopes différents du domaine de liaison au récepteur (RBD) de la protéine de pointe du coronavirus 2 du syndrome respiratoire aigu sévère (SRAS-CoV-2) et neutraliser un large éventail de variantes, y compris la variante Omicron.
Étude : Développement d’anticorps bispécifiques entièrement humains qui bloquent efficacement les infections à pseudovirus variant d’Omicron. Crédit d’image : Huen Structure Bio / Shutterstock
Sommaire
Arrière-plan
Le SRAS-CoV-2 est un virus à acide ribonucléique (ARN) simple brin enveloppé qui pénètre dans les cellules hôtes des mammifères par le biais d’interactions entre le RBD dans la sous-unité S1 de la protéine de pointe et le récepteur de l’enzyme de conversion de l’angiotensine-2 (ACE-2) dans la cellule de mammifère. La sérine protéase transmembranaire 2 (TMPRSS2) présente dans la cellule de mammifère facilite l’entrée virale en clivant la protéine de pointe.
L’accumulation de mutations dans le SRAS-CoV-2 a conduit à l’émergence de multiples variantes telles que Alpha, Beta, Delta et Omicron, Omicron et ses sous-variantes portant le plus grand nombre de nouvelles mutations. Ces mutations dans la région de la protéine de pointe ont permis aux sous-variantes d’Omicron d’échapper aux anticorps neutralisants induits par les vaccins contre la maladie à coronavirus 2019 (COVID-19) ainsi qu’aux anticorps monoclonaux qui ont, jusqu’à présent, été utilisés avec succès pour traiter les infections des variantes précédentes.
Bien que les cocktails d’anticorps monoclonaux continuent d’être relativement efficaces contre les sous-variants d’Omicron, les anticorps monoclonaux bispécifiques qui se lient simultanément à deux épitopes indépendants sur le virus présentent une solution plus rapide et plus rentable qui doit être explorée plus avant.
À propos de l’étude
La présente étude a utilisé le clonage de cellules B uniques et des souris transgéniques humanisées pour générer des anticorps monoclonaux qui pourraient se lier et neutraliser plusieurs variantes du SRAS-CoV-2. Des souris ATX-GK femelles ont été immunisées par voie sous-cutanée avec une protéine de pointe dissoute dans une solution saline tamponnée au phosphate avec un adjuvant et ont reçu une injection de rappel chaque semaine pendant trois semaines. Trois jours après la troisième dose de rappel, une dose de rappel supplémentaire a été administrée par voie intrapéritonéale et les souris ont été euthanasiées quatre jours après la dernière dose de rappel. La moelle osseuse, la rate, le sang et les ganglions lymphatiques drainants ont été prélevés pour obtenir des anticorps.
Des cellules B mémoire de souris transgéniques humanisées en alliage ont été utilisées pour amplifier les chaînes lourdes et légères variables à l’aide d’une seule technologie de fermeture des cellules B. Deux clones d’anticorps qui reconnaissent différents épitopes de protéines de pointe ont été sélectionnés pour produire les anticorps monoclonaux bispécifiques. La transfection à micro-échelle utilisant un seul vecteur d’expression exprimé dans les cellules ovariennes de hamsters chinois a été utilisée pour la production à haut débit d’anticorps monoclonaux.
La chromatographie liquide rapide sur protéines a été utilisée pour purifier les anticorps du surnageant de culture, qui ont été quantifiés à l’aide d’un NanoDrop, et la concentration des anticorps monoclonaux a été calculée. De plus, l’immunoglobuline G monoclonale anti-monoclonale de cheval (mIgG) conjuguée à la peroxydase de raifort (HRP) a été utilisée pour détecter les titres d’anticorps spécifiques du SRAS-CoV-2, et un test d’interférométrie de couche biologique (BLI) a été utilisé pour dépister les anti- Anticorps monoclonaux SARS-CoV-2. En outre, des tests de blocage de l’ACE-2 et des tests de pseudovirus ont été effectués pour tester si les anticorps monoclonaux pouvaient se lier efficacement au virus et bloquer la liaison du récepteur ACE-2.
Résultats
Les résultats ont rapporté que les deux anticorps monoclonaux sélectionnés – SARS-CoV2-83 et SARS-CoV2-81 – étaient capables de se lier à plusieurs variantes du SARS-CoV-2, y compris la variante Omicron avec des affinités modérées à fortes. Les deux anticorps monoclonaux n’ont cependant pas été capables de se lier à l’un des mutants (L452R) du variant Delta. Les anticorps bispécifiques conçus en combinant les chaînes lourdes ou légères du SARS-CoV2-81 avec le fragment variable à chaîne unique du SARS-CoV2-83 ont pu se lier à toutes les variantes du SARS-CoV-2 qui ont été testées, y compris le Delta variante mutante L452R.
De plus, les anticorps bispécifiques ont exprimé une avidité plus élevée se liant au RBD du variant Omicron que celle exprimée par les deux anticorps monoclonaux indépendamment. L’un des anticorps bispécifiques (Bs-A) était également capable de neutraliser le pseudovirus Omicron dans le in vitro essai. Ces découvertes ont indiqué que les anticorps bispécifiques exprimaient une avidité accrue pendant la liaison et une plus grande capacité de neutralisation par rapport aux deux anticorps monoclonaux parents.
conclusion
Dans l’ensemble, les résultats ont indiqué que les anticorps monoclonaux bispécifiques entièrement humains développés à l’aide de deux nouveaux anticorps monoclonaux SARS-CoV2-83 et SARS-CoV2-81 ont montré une liaison et une neutralisation à haute avidité de plusieurs variantes du SARS-CoV-2, y compris la variante Omicron . L’avidité du SRAS-CoV2-81 s’est également avérée comparable à celle du sotrovimab actuellement utilisé, fabriqué par GSK, ce qui indique qu’il pourrait s’agir d’un candidat potentiel d’anticorps monoclonal à usage clinique.
Les auteurs pensent que si les anticorps bispécifiques sont efficaces contre plusieurs variants du SRAS-CoV-2, l’émergence rapide de nouveaux variants remet en question l’efficacité de ces thérapies par anticorps, soulignant la nécessité continue de développer des anticorps bispécifiques largement neutralisants qui ciblent différents épitopes.
*Avis important: bioRxiv publie des rapports scientifiques préliminaires qui ne sont pas évalués par des pairs et, par conséquent, ne doivent pas être considérés comme concluants, guider la pratique clinique/les comportements liés à la santé, ou traités comme des informations établies.
