NewsMedical s’entretient avec Cerba Research sur la manière de réaliser le profilage des points de contrôle des cellules immunitaires des tumeurs solides à l’aide de l’immunofluorescence multiplex.
Sommaire
Pourriez-vous s’il vous plaît fournir à nos lecteurs une brève introduction au profilage des points de contrôle des cellules immunitaires ?
Les protéines de point de contrôle immunitaire en tant que régulateurs sont essentielles pour gérer l’auto-tolérance et permettre aux cellules cancéreuses de contourner la destruction immunitaire.
Les thérapies de blocage des inhibiteurs de point de contrôle (CKI) peuvent aider à restaurer l’immunité antitumorale. Le blocage combiné a démontré le potentiel d’une inhibition de la croissance tumorale plus importante que les monothérapies dans les études précliniques.
L’immunofluorescence multiplex offre un avantage technique en permettant la détection de la co-expression et de l’organisation spatiale de plusieurs cibles au sein d’une architecture tissulaire préservée sur une seule lame. Cerba Research a développé l’HISTOPROFILE®-Panneau d’immunohistochimie multiplex CKI pour offrir un profilage personnalisé des points de contrôle des cellules immunitaires.
Qu’est-ce que la conception et la validation multiplex ?
Protocole multiplex séquentiel avec Opal® (Akoya Biosciences) fluorophores a été réalisé sur le colorateur de lames BOND RX (Leica). Le panel multiplex a ensuite été testé sur des amygdales humaines saines et des tumeurs de la prostate, du foie, des poumons et de la peau. Des images multispectrales de lames entières ont ensuite été acquises avec le VECTRA ® Scanner de lames PolarisTM (Akoya Biosciences) pour les exigences de validation.
Quelles méthodes d’analyse sont appliquées lors d’une étude type pour obtenir la validation ?
Les images que nous acquérons sont généralement analysées avec INFORM® (Akoya Biosciences) ou HALO® (Indica Labs) Module Highplex. Une fois que nous avons validé un panel de base composé de CD3, CD8, mort cellulaire programmée 1, mort programmée-ligand 1 et DAPI (amygdale humaine, barre d’échelle = 100 µm), la position d’intérêt (Px) dans le multiplex est comparée à le protocole de référence (simplex IHC) (P1). Ensuite, le pourcentage de la zone positive a été comparé entre les deux protocoles pour valider le panel. Pour évaluer la concordance, HALO est utilisé, permettant la validation du panel multiplex complet.
Comment déterminer la reproductibilité des résultats ?
Pendant trois jours, trois opérateurs différents ont expérimenté l’Histoprofile®-Panneau multiplex CKI. Cette approche a démontré visuellement une coloration équivalente pour toutes les cibles. Chaque cible a ensuite été analysée sur trois scans complets à l’aide de HALO. Les résultats ont révélé des profils de coloration équivalents pour chaque cible.
Comment établir la validité des résultats ?
L’histoprofil®-Le panel multiplex CKI avec IDO a été testé pour sa robustesse et chaque cible représentative – CD3, CD8, PD-1, PD-L1, IDO et DAPI a été détectée dans l’adénocarcinome pulmonaire, le carcinome hépatocellulaire, l’adénocarcinome de la prostate et le mélanome. Cela a permis d’établir la validité des résultats.
Pouvez-vous décrire comment l’approche sert à modifier la cible du point de contrôle immunitaire ?
Les cibles TIGIT, LAG-3 et CD47 peuvent être facilement appliquées aux panneaux de base CD3, CD8, PD-1, PD-L1 et DAPI, ce qui démontre la flexibilité de l’Histalim Histoprofile®-Panneau multiplex CKI.
La nature flexible de la méthode facilite l’interchangeabilité des cibles de point de contrôle immunitaire, ce qui se traduit par la possibilité de modifier l’application sur plusieurs types de tissus.
HISTOPROFIL de base®-Panneau CKI : A) Nous avons validé un panel de base, composé de CD3 (rouge), CD8 (jaune), mort cellulaire programmée 1 (PD-1, orange), mort programmée-ligand 1 (PD-L1, vert) et DAPI (bleu ) (amygdale humaine, barre d’échelle = 100 μm). Pour chaque marqueur, la position d’intérêt (Px) dans le multiplex a été comparée au protocole de référence (simplex IHC) (P1). B) Le % de surface positive a été comparé entre les deux protocoles pour valider le panel. Crédit d’image : Recherche Cerba
Crédit d’image : Recherche Cerba
Crédit d’image : Recherche Cerba
Crédit d’image : Recherche Cerba
Crédit d’image : Recherche Cerba
Crédit d’image: Cerba Research
À propos de Cerba Research
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