Dans cet entretien, Cerba Research décrit comment ses équipes ont pu détecter des cellules T mémoire résidentes dans des tumeurs solides grâce à l’immunofluorescence multiplex.
Sommaire
Pourriez-vous donner un aperçu des lymphocytes T mémoire résidant dans les tissus et de leur rôle dans un contexte clinique ?
Les lymphocytes T mémoire résidant dans les tissus (TRM) sont représentatifs d’un genre de lymphocytes T localisés dans les tissus périphériques qui ne retournent pas à la circulation. Comme ils sont intégrés dans les tissus, ils représentent la réponse initiale des lymphocytes T dans les infections locales et les conditions inflammatoires.
Les TRM se distinguent par l’expression de CD103, CD69 et CD49a. La TRM joue un rôle central dans le développement et l’efficacité des vaccins contre le cancer et a été associée à l’amélioration du pronostic et de la survie dans un certain nombre de cancers. Cependant, les comparaisons de TRM et de cellules T CD8 cytotoxiques dans le microenvironnement tumoral sont limitées.
Quel était l’objectif principal de votre étude ?
Nous avons entrepris de développer l’HISTOPROFILE®– Panel multiplex TRM pour phénotyper les cellules T résidentes à mémoire dans les tumeurs solides et montrer le potentiel du panel pour étudier les sous-populations TRM dans les résections tissulaires NSCLC FFPE. Ceci a été réalisé en utilisant la conception et la validation du panel.
Quelles étaient vos principales cibles pendant la recherche ?
Les cibles étaient CD3/CD8/CD49a/CD69/CD103 ; Cellules T résidentes en mémoire – CD8+/CD103+; et sous-types de lymphocytes T résidents en mémoire – CD8+/CD49a+CD8+/CD69+CD8+/CD103+/CD69+CD8+/CD103+/CD69+/CD49a+.
Pour ce faire, nous nous sommes procuré trois échantillons de résections tissulaires de NSCLC auprès de la Cerba Reseach Montpellier Biobank. La zone tumorale NSCLC sur des lames colorées à l’hématoxyline et à l’éosine a été identifiée par un pathologiste.
Quelles méthodes d’application ont été appliquées lors de la validation de l’étude ?
Une fois les lames identifiées, un protocole multiplex séquentiel avec Opal® (Akoya Biosciences) des fluorophores ont été appliqués sur le BOND RX® (Leica) coloration de lames. Suite à cela, des images multispectrales ont été capturées à l’aide du VECTRA® Scanner de lames PolarisTM (Akoya Biosciences) tandis que l’analyse de l’image de la lame entière a été effectuée à l’aide du HALO® (Indica Labs) Module Highplex sur des images NSCLC non mélangées.
Pourriez-vous décrire la méthode de détection utilisée tout au long de la recherche ?
Des lames simplex ont été colorées pour chaque biomarqueur dans un protocole simplex et comparées à une coupe en série colorée avec le panel multiplex HISTOPROFILE®-TRM. La concordance de coloration entre les lames multiplex et simplex a été déterminée avec HALO® sans déconvolution multispectrale. La précision du protocole a été déterminée par analyse de répétabilité intra-série et analyse de reproductibilité inter-série (données non présentées).
Comment testez-vous l’efficacité de la conception du panneau ?
La robustesse du panel a été démontrée sur diverses tumeurs solides humaines, notamment les adénocarcinomes de la prostate, du côlon, du poumon et du rein, le lymphome de Hodgkin, le mélanome et l’adénocarcinome séreux de l’ovaire. Par la suite, des images multispectrales à balayage complet ont été analysées à l’aide de HALO pour déterminer l’efficacité de la méthode.
Pouvez-vous résumer pourquoi le panel multiplex est bien adapté à la détection des lymphocytes T mémoire résidant dans les tissus dans les tumeurs solides ?
L’HISTOPROFIL®-TRM Panel se compose de marqueurs CD8, CD3, CD69, CD103 et CD49a, et a été spécifiquement développé et utilisé pour la détection des cellules T résidentes dans des échantillons de NSCLC humains.
Le panel démontre puissamment la nouvelle capacité à phénotyper le TRM par diverses combinaisons des cibles incluses.
Diverses sous-populations de TRM dans les zones tumorales et non tumorales ont pu être déterminées par analyse d’image. La force et la robustesse du panel multiplex en font un excellent outil pour étudier les populations de TRM dans une gamme de tumeurs solides humaines.
Les lames simplex ont été colorées pour chaque biomarqueur individuel dans un protocole simplex et comparées à une section en série colorée avec le multiplex IHC. La concordance de coloration entre la lame multiplex et les lames simplex a été déterminée par analyse avec HALO® après déconvolution multispectrale. A) Exemples d’images (en haut) d’une diapositive simplex pour la cible A (à gauche) et la diapositive multiplex (à droite) et le HALO correspondant® masques identifiant les cellules positives (en bas). B) Résultats de l’analyse des panneaux Treg humains et souris. Le pourcentage de cellules positives de la lame simplex (barre noire) est comparé à la lame multiplex (barre blanche). Des résultats satisfaisants ont été obtenus pour HISTOPROFILE® -Panneaux Treg. Crédit d’image : Recherche Cerba
Crédit d’image : Recherche Cerba
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À propos de Cerba Research
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