Une étude récente publiée sur bioRxiv* Le serveur de préimpression a évalué l’impact de l’immunisation contre le coronavirus 2 du syndrome respiratoire aigu sévère déficient en protéine recombinante (rSARS-CoV-2) contre la transmission du coronavirus 2 du syndrome respiratoire aigu sévère (SARS-CoV-2) et la gravité de la maladie.
De nouveaux rapports notent l’efficacité décroissante des vaccins contre la maladie à coronavirus 2019 (COVID-19). Diverses études ont rapporté le potentiel des vaccins vivants atténués (VLA) pour fournir une protection puissante contre diverses variantes préoccupantes du SRAS-CoV-2 (COV).
Sommaire
À propos de l’étude
La présente étude a examiné la puissance, l’innocuité et la stabilité du double rSARS-CoV-2 déficient en ORF en tant que LAV pour la prophylaxie de l’infection par le SRAS-CoV-2 et des maladies apparentées.
Des cellules épithéliales rénales de singes verts africains ont été collectées à partir de la collection de cultures de type américain (ATCC) avec des cellules Vero E6 exprimant l’enzyme de conversion de l’angiotensine humaine 2 (hACE2) et la sérine protéase transmembranaire 2 (TMPRSS2). Des protéines de la pointe (S), de la nucléocapside (N), de l’enveloppe (E) et de la membrane (M) du SRAS-CoV-2 ont également été obtenues. L’équipe a également collecté les COV SARS-CoV-2 USA-WA1/2020, alpha, bêta et delta tandis que le type sauvage rSARS-CoV-2 (WT) et le rSARS-CoV-2 ont été générés.
Les protéines de cadre de lecture ouvert (ORF) accessoires ont été doublement supprimées par réaction en chaîne par polymérase inverse (PCR) dans le fragment viral 1, qui a ensuite été réassemblé à l’aide d’endonucléases de restriction. Cela a été suivi par l’infection des cellules Vero E6 avec le rSARS-CoV-2 WT et les délétions de ORF3a/ORF7a, ORF3a/ORF6 et ORF3a/ORF7b. Les cellules ont ensuite été immunocolorées et un essai sur plaque a été effectué.
L’acide ribonucléique total (ARN) des cellules Vero témoins ou infectées par le virus a été extrait. L’amplification des gènes viraux N, ORF3a, ORF6, ORF7a, ORF7b et ORF8 a ensuite été réalisée par reverse transcription-PCR (RT-PCR). Le dosage immuno-enzymatique (ELISPOT) a été utilisé pour dénombrer les cellules T spécifiques de l’antigène sécrétant de l’interféron gamma (IFN-γ). Ensuite, la production de cytokines intracellulaires a été détectée dans les cellules Vero à l’aide d’une analyse par cytométrie en flux. En outre, un test immuno-enzymatique (ELISA) et un test de microneutralisation par réduction de plaque (PRMNT) ont été effectués pour chaque échantillon.
Résultats
Les résultats de l’étude ont montré qu’un total de quatre allèles non de référence ont été détectés dans le double rSARS-CoV-2 déficient en ORF. Sur les quatre allèles non de référence, deux avec des fréquences de 58,52 % et 57,69 % ont été trouvés dans le rSARS-CoV-2 ORF3a/ORF6, tandis qu’un avait une fréquence de 12,04 % dans le rSARS-CoV-2 ORF3a/ORF7a et un autre avait une fréquence de 14,94 % dans rSARS-CoV-2 ORF3a/ORF7b.
Les trois rSARS-CoV-2 déficients en double ORF avaient des diamètres de plaque plus petits que celui du rSARS-CoV-2 WT et également des titres maximaux inférieurs pour hACE2 par rapport au rSARS-CoV-2 WT. De plus, des titres plus faibles dans les échantillons nasaux et pulmonaires de souris infectées ont été observés dans le rSARS-CoV-2 déficient en double ORF par rapport au rSARS-CoV-2 WT.
L’analyse des réponses immunitaires dans les poumons de souris infectées par hACE2 et traitées avec un double rSARS-CoV-2 déficient en ORF à 2 points par pouce linéaire (dpi) n’a montré aucune différence notable, sauf que le rSARS-CoV-2 ORF3a/ORF7a infecté les souris avaient des réponses IFN réduites. Cependant, à 4 dpi, des niveaux d’IFN-α inférieurs ont été observés chez les souris infectées par le rSARS-CoV-2 déficient en ORF que par le rSARS-CoV-2 WT, alors qu’aucune réduction de ce type n’a été trouvée dans les niveaux d’IFN-γ.
Toutes les souris transgéniques infectées par hACE2 et rSARS-CoV-2 ORF3a/ORF7a et deux des cinq souris infectées par rSARS-CoV-2 ORF3a/ORF6 ont succombé à une infection de 9 dpi tandis que trois de ces dernières se sont rétablies et ont survécu à l’infection. De plus, alors que toutes les souris infectées par rSARS-CoV-2 ORF3a/ORF7a et rSARS-CoV-2 WT ont succombé à une infection virale, la durée de survie des souris infectées par la première était plus élevée que la seconde.
Dans l’ensemble, l’équipe a observé un taux de survie de 60 % pour les souris traitées par rSARS-CoV-2 ORF3a/ORF6 et de 100 % pour les souris traitées par rSARS-CoV-2 ORF3a/ORF7b.
L’étude a également examiné l’innocuité et l’efficacité du double ORF déficient rSARS-CoV-2 chez les hamsters. Une réduction de 15 % du poids corporel des hamsters infectés par le rSARS-CoV-2 WT à 6 dpi a été observée alors qu’aucun changement de poids corporel n’était présent chez les hamsters infectés par le rSARS-CoV-2 déficient en double ORF.
De plus, aucune charge virale infectieuse n’a été trouvée chez les hamsters infectés par le double rSARS-CoV-2 déficient en ORF. De plus, un potentiel neutralisant élevé a été observé chez les hamsters infectés par le rSARS-CoV-2 déficient en double ORF contre la souche SARS-CoV-2 WA1 et les COV alpha, bêta, delta et Omicron alors qu’aucune infectiosité virale n’a été détectée dans le tissus.
Conclusion
Les résultats de l’étude ont montré que les trois rSARS-CoV-2 déficients en double ORF pouvaient exprimer efficacement les protéines structurelles virales sans la présence de différentes protéines accessoires. Ces rSARS-CoV-2 déficients en double ORF pourraient induire une réponse immunitaire robuste et adaptative après une administration intranasale unique qui a fourni une protection suffisante contre l’infection et la gravité du SRAS-CoV-2. Les chercheurs pensent que cette étude fait du rSARS-CoV-2 déficient en double ORF un candidat LAV prophylactique idéal contre le COVID-19.
*Avis important
bioRxiv publie des rapports scientifiques préliminaires qui ne sont pas évalués par des pairs et, par conséquent, ne doivent pas être considérés comme concluants, guider la pratique clinique/les comportements liés à la santé, ou traités comme des informations établies.
